- 發(fā)表時(shí)間2024-09-13
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在現(xiàn)代化學(xué)分析領(lǐng)域，高效液相色譜（HPLC）技術(shù)憑借其高分離效率、高靈敏度和準(zhǔn)確性，成為了重要的分析手段。而在HPLC系統(tǒng)中，C18液相柱及保護(hù)柱扮演著至關(guān)重要的角色。
C18液相柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，具有較高的碳含量和出色的疏水性。這使得它對(duì)各種類型的生物大分子有著強(qiáng)大的適應(yīng)能力，適用范圍廣泛，是高效液相色譜儀分析中極為重要的色譜柱類型。
在使用C18液相柱時(shí)，有許多需要注意的要點(diǎn)。新的C18色譜柱在使用前，必須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速?zèng)_洗，這樣能使固定相充分潤(rùn)濕、碳鏈?zhǔn)嬲梗屔V柱的性能達(dá)到最佳狀態(tài)。而在液相色譜儀檢測(cè)分析樣品完畢后，也需要沖洗色譜柱。特別是當(dāng)流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí)，必須將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積。
如果色譜柱長(zhǎng)期閑置，要將其沖洗，并保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液中，比如90%甲醇水。同時(shí)，由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng)，使用過(guò)程中應(yīng)盡量避免高水相條件，建議水相比例不超過(guò)90%，否則易引起固定相疏水塌陷，導(dǎo)致柱效迅速下降，甚至造成不可逆的負(fù)面影響。
當(dāng)色譜柱出現(xiàn)壓力升高、柱性能下降的情況，通常是因?yàn)樯V柱被污染，對(duì)其進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效。而色譜柱壓力驟升，可能是鹽析出或篩板堵塞引起。若是鹽析出，用10%甲醇水低流速?zèng)_洗至壓力恢復(fù)即可；若不是鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動(dòng)相反沖色譜柱，若反沖半小時(shí)仍無(wú)效果則需尋找其他原因。
為了延長(zhǎng)C18液相柱的使用壽命，保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，保護(hù)柱的使用是不可少的。在HPLC系統(tǒng)中，不能保證所注射樣品能夠洗脫，尤其是中藥及血液樣品，每次進(jìn)樣總會(huì)有一部分殘留在柱頭，久而久之就會(huì)使柱頭失效。而保護(hù)柱能夠有效地解決這一問(wèn)題。
這種新型的保護(hù)柱組件結(jié)合了不銹鋼的強(qiáng)度和PEEK預(yù)填柱芯的方便和高效。無(wú)需使用工具，將一小段與柱填料相同的保護(hù)柱置入進(jìn)樣閥和色譜柱之間，就能延長(zhǎng)色譜柱的壽命，保證重現(xiàn)性結(jié)果。
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